MiSeq에서 첫 번째 이미징 사이클 후 발생하는 오류는 기기가 최적의 초점 평면을 찾기에 클러스터 강도가 충분하지 않을 수 있음을 나타냅니다.

잠재적 오류 메시지:

• 최상의 초점을 찾을 수 없음
• 최적 초점이 범위의 가장자리에 너무 가까움
• 사용 가능한 신호가 없습니다. 클러스터링에 실패했을 수 있습니다.
• Through-focus 피크가 SNR 임계값을 초과하지 않음
• Z 모터가 소프트 한계를 벗어남

가능한 기기 원인은 다음과 같습니다.

• 클러스터 생성 또는 첫 번째 염기 화학과 관련된 시약의 전달 부족
• 플로우 셀 온도 제어 문제
• 광학 시스템 문제(드물게)

가능한 라이브러리 및 시약 원인은 다음과 같습니다.

• 유효 기한이 만료되었거나 부적절하게 보관된 시약 사용
• 라이브러리 설계 및/또는 품질/정량 문제
• 라이브러리 설계 문제로 인해 리드 1 프라이머 혼성화 불량
• 호환되지 않는 프라이머 사용
• 클러스터링 부족 또는 오버클러스터링

사이클 1 오류 문제 해결

기기의 유체, 온도 및 모션 시스템이 예상대로 작동하는지 확인하려면 먼저 MiSeq® System 가이드에 설명된 대로 기기에서 시스템 점검을 수행합니다.

1. 기기의 지시에 따라 런 후 세척을 수행합니다.
2. 시스템 가이드에 설명된 대로 기기의 전원을 껐다 켭니다.
3. 기기 관리로 이동한 후 시스템 점검을 선택합니다.
4. 모든 모션 테스트, 프라임 시약 라인, 열 램핑 및 볼륨 테스트 모두 선택

테스트가 완료되면 화면의 왼쪽 하단 모서리에 있는 세부 정보 표시를 선택하여 결과의 전체 목록을 확인합니다. 볼륨 테스트가 PR2 위치 이외의 위치에 실패하거나 다른 테스트 중 하나라도 실패하는 경우 techsupport@illumina.com으로 Illumina 기술 지원 부서에 이메일을 보내 추가 지원을 요청하십시오.

시스템 점검이 통과되면 라이브러리 또는 시약 문제로 인해 오류가 발생할 수 있습니다. 가장 일반적인 문제를 조사하려면:

• 시약 키트의 유효 기간 및 적절한 보관 확인
• 라이브러리 설계가 Illumina 플랫폼에서 실행할 수 있는지 확인합니다.
• Illumina 권장 방법을 사용하여 라이브러리의 품질 및 정량화 확인
• 맞춤형 프라이머가 MiSeq의 65°C 어닐링 온도와 호환되는지 확인합니다.
• 맞춤형 프라이머가 올바른 카트리지 웰에 추가되었는지 확인합니다(샘플 시트에 변경 없이 기존 프라이머 웰에 스파이크되거나 맞춤형 프라이머가 사용되고 있음을 나타내는 샘플 시트가 포함된 맞춤형 프라이머 웰에 추가됨).

라이브러리 또는 시약에 뚜렷한 문제가 없는 경우 20% PhiX Control Spike in으로 런을 반복합니다. 이는 다음 런에 대한 클러스터링을 위한 양성 대조군 역할을 하여 이전 오류가 기저 라이브러리 문제로 인해 발생했는지 여부를 결정합니다.

다음 런의 사이클 1에서 오류가 발생하는 경우, techsupport@illumina.com Illumina 기술 지원팀에 연락하여 추가 지원을 받으십시오.

추가 리소스:

MiSeq® System 맞춤형 프라이머 가이드
맞춤형 프라이머를 Illumina 시퀀싱 프라이머에 스파이킹
MiSeq 시스템 Denature and Dilute Libraries Guide