다음 지침은 고객 맞춤형 라이브러리를 시퀀싱하는 고객의 데이터 수율과 품질을 극대화합니다. 모든 Illumina 라이브러리는 최소 26사이클의 첫 번째 리드 길이로 시퀀싱되도록 설계되었습니다. Illumina는 또한 신뢰할 수 있는 염기 검출 및 품질 채점을 보장하기 위해 최소 26사이클로 시퀀싱할 맞춤형 라이브러리를 설계할 것을 권장합니다.

런 설정 중에 지정된 경우, Illumina 시퀀싱 시스템은 리드 1에 대해 25사이클 미만을 수행할 수 있습니다. 이 옵션은 권장되거나 지원되지 않습니다. Illumina 1차 분석 소프트웨어인 Real-Time Analysis(RTA)는 품질 메트릭스 계산을 위해 리드 1의 첫 25사이클을 사용하도록 최적화되고 검증되었습니다. Illumina는 모든 RTA 계산이 완료되었는지 확인하기 위해 리드 1에 대해 최소 26사이클을 실행할 것을 권장합니다. 리드 1에서 25사이클 미만의 런의 경우 RTA 보고서는 필터 백분율과 사용 가능한 리드 1 사이클의 계산된 품질 점수를 통과합니다. 그러나 RTA 성능은 이러한 조건에서 테스트되지 않았으므로, 이러한 런에 대해 보고된 순차 필터 및 품질 점수 평가 지표를 통과하는 리드의 선택은 리드 1 길이가 25주기 이상인 런과 동등하거나 직접적으로 유사하지 않습니다. Read 1에서 25사이클 미만의 시퀀싱을 수행하는 고객의 경우 품질 지표에 대한 독립적인 검증이 필요합니다.

내부 바코드, 프라이머 어닐링 사이트 또는 단일중합체와 같은 저다양성 시퀀스 영역이 있는 맞춤형 라이브러리의 경우, 25사이클 미만의 첫 번째 리드를 시퀀싱하는 대신 PhiX와 같은 균형이 잘 잡힌 라이브러리를 추가하여 염기 다양성을 증가시키는 것을 고려하십시오. 맞춤형 라이브러리에 포함할 PhiX의 비율은 기기 및 라이브러리에 따라 다르며 최적화가 필요할 수 있습니다. 맞춤형 시퀀싱 프라이머를 사용하는 라이브러리를 시퀀싱할 때 맞춤형 프라이머를 Illumina 프라이머에 스파이킹하여 PhiX를 사용합니다. 다음 지원 게시판은 추가 정보를 제공합니다. 맞춤형 프라이머를 Illumina 시퀀싱 프라이머에 스파이킹.