HiSeq v4 고출력 플로우 셀의 재혼합은 일반적으로 HiSeq 기기에서 수행되지만, 일부의 경우 리드 1 재혼합이 cBot에서 수행될 수 있습니다. 이 게시판은 이러한 재혼합을 수행하는 데 필요한 단계와 시약에 대해 설명합니다.
다음과 같은 시약과 소모품이 필요합니다.
- HiSeq Multi-Primer Rehyb v4 Kit v4[GD-403-4001]의 FDR, SB2 및 Read 1 시퀀싱 프라이머(HP10)**
- HiSeq v4 클러스터 키트의 남은 HT1(> 3.6ml)
- 재혼합할 HiSeq v4 고출력 시퀀싱 플로우 셀
- 사용한 HiSeq v4 cBot 클러스터 플레이트와 원래 튜브 스트립*
*사용된 HiSeq v4 클러스터링 플레이트를 사용할 수 없는 경우 다른 클러스터 플레이트의 8-튜브 스트립을 사용할 수 있습니다. 튜브 스트립은 시약 오염을 방지하기 위해 검사실 등급의 물로 철저히 세척해야 합니다.
**맞춤형 프라이머를 사용하는 경우 HP10을 0.5 µM의 맞춤형 Read 1 시퀀싱 프라이머로 교체하십시오.
시작하기 전에 다음 사항에 유의하십시오.
- 재혼합을 수행하려면 클러스터 키트에서 최소 3.6ml의 HT1이 필요합니다.
- HiSeq v4 재혼합 레시피는 cBot 소프트웨어의 v3.0.46 이상에서 사용할 수 있습니다.
재혼합을 수행하려면 다음 단계를 따르십시오.
- SB2를 실온의 수조에서 60분간 해동합니다.
- FDR 및 HP10 시약을 실온 수조에서 20분간 해동합니다.
- 표시된 용량으로 다음 행의 튜브 스트립에 시약을 피펫팅합니다.
- 1열 – HT1(튜브당 최소 450 µl)
- 2열 – HP10(튜브당 최소 150 µl)
- 5열 – FDR(튜브당 최소 250 µl)
- 7열 – SB2(튜브당 최소 350 µl)
- 플로우 셀의 유형에 따라 적절한 v4 재혼합 레시피를 선택합니다.
- PE_HiSeq_Cluster_Kit_v4_cBot_Rehyb_recipe_v9.0
- SR_HiSeq_Cluster_Kit_v4_cBot_Rehyb_recipe_v9.0
- 플로우 셀을 로드하고 사용한 HiSeq v4 플레이트 ID를 스캔합니다. 다른 유형의 시약 플레이트를 사용하는 경우 시약 플레이트 ID를 GA1234567-PE4로 수동으로 입력합니다.
- 클러스터 플레이트를 cBot에 로드하고 화면의 지시에 따라 런 설정을 완료합니다.
재혼합이 완료되면 재혼합된 플로우 셀을 사용하여 HiSeq에서 새 런을 설정합니다.