MiSeq Denature and Dilute Libraries Guide에는 Standard Normalization Method를 사용하여 2nM 및 4nM 라이브러리를 변성하는 방법이 나와 있습니다. 변성 단계는 HT1로 희석한 최종 용액에서 NaOH 농도가 1 mM 이하가 되도록 한다. NaOH 농도가 높을수록 플로우 셀에 대한 라이브러리 혼성화를 억제하여 클러스터 밀도를 낮출 수 있습니다.

MiSeq 시퀀싱을 위해 2 nM 미만이지만 최소 0.5 nM인 라이브러리를 준비할 수 있습니다. 이는 라이브러리가 20 pM으로 희석될 때까지 NextSeq 500 및 550 시퀀싱 시스템 Denature and Dilute Libraries Guide의 표준 정규화 방법에 따라 수행됩니다. 이 프로토콜에서는 NaOH가 최종 용액에서 완전히 가수분해되도록 하기 위해 200mM Tris-HCl을 첨가하여 과잉 NaOH를 상쇄합니다. 

< 2 nM 라이브러리를 변성하려면 NextSeq 500 및 550 시퀀싱 시스템 Denature and Dilute Libraries Guide의 라이브러리 농도 1 nM 또는 0.5 nM 시작 단계를 따르십시오. 그림 1을 참조하십시오. 라이브러리가 20 pM인 경우 MiSeq® System 변성 Denature and Dilute Libraries Guide20 pM 라이브러리 단계로 진행합니다. 그림 2를 참조하십시오.

자세한 지침은 특정 기기의 특정 변성 및 희석 라이브러리 가이드를 참조하십시오.

그림 1. NextSeq 500 및 550 시퀀싱 시스템 변성 및 희석 Denature and Dilute Libraries Guide 단계

그림 2. MiSeq® System 변성 Denature and Dilute Libraries Guide